近期，青海省人民医院赵强强团队在Molecular Cancer（IF=27.7）上发表题为“Unveiling the PDK4-centered rituximab-resistant mechanism in DLBCL: the potential of the “Smart” exosome nanoparticle therapy.”的研究。弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中利妥昔单抗（rituximab）耐药的关键机制主要涉及PDK4对CD20表达的负调控。研究团队发现，PDK4通过磷酸化HDAC8调节CD20表达，导致利妥昔单抗耐药。为此，团队开发了一种外泌体纳米颗粒复合物，通过靶向PDK4/HDAC8/CD20途径有效克服耐药性，为DLBCL患者的治疗提供了新的策略。
欣博盛生物非常荣幸能够作为供应商为该项研究提供高品质ELISA试剂盒，为生物医学领域的科研探索贡献一份力量。
引用产品
该项研究中，使用了欣博盛生物（NeoBioscience Technology Co, Ltd）的Mouse TNF-α, IFN-γ, IL-12和IL-6 ELISA Kits，用于检测样本中相关指标的含量。
货号 | 产品名称 | 灵敏度 | 检测范围 |
QuantiCyto® Mouse TNF-α ELISA kit（小鼠肿瘤坏死因子-α） | 15.6pg/ml | 31.25-2000pg/ml | |
QuantiCyto® Mouse IFN-γ ELISA kit（小鼠γ干扰素） | 3.9pg/ml | 7.8-500pg/ml | |
QuantiCyto® Mouse IL-12p70 ELISA kit（小鼠白细胞介素-12p70） | 7.8pg/ml | 15.6-1000pg/ml | |
QuantiCyto® Mouse IL-6 ELISA kit（小鼠白细胞介素-6） | 7.8pg/ml | 15.6-1000pg/ml |
研究详情
淋巴瘤是一组起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤，非霍奇金淋巴瘤（NHL）约占 90%。其中，弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL）占 NHL 病例的 35-40%。尽管R-CHOP方案（利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松）提高了针对DLBCL患者的治疗效果，但约40%的患者由于化疗耐药而进入复发或难治阶段。此外，在这些复发或难治患者中，只有不到20%能够从造血干细胞移植中获益。虽然CAR-T细胞疗法在治疗复发或难治性DLBCL方面疗效显著，但高成本、不良反应以及患者复发的可能性依旧是重大挑战。DLBCL患者的复发倾向与利妥昔单抗的临床疗效密切相关，对该药物的耐药性是治疗中的一个长期障碍。因此，揭示利妥昔单抗的耐药机制并创新治疗方法对抗耐药性是一个关键的研究领域。
CD20的表达水平严重影响利妥昔单抗治疗淋巴瘤细胞中DLBCL的疗效。研究表明，CD20表达水平高且对利妥昔单抗敏感的患者在经过治疗后会出现CD20表达降低甚至CD20阴性的情况，导致获得性耐药的产生。研究团队利用RNA-Seq测序技术比较了利妥昔单抗敏感患者和耐药患者的基因表达情况，结果显示后组患者的丙酮酸脱氢酶激酶 4（PDK4）显著上调。随后的体外和体内研究表明，PDK4通过下调CD20的表达，介导DLBCL对利妥昔单抗的耐药性。尽管使用siRNA进行靶向治疗有诸多好处，但siRNA有着半衰期短、膜穿透性差、在血液循环中降解快、稳定性低的缺陷。因此，开发一种有效的递送载体对于成功施用PDK4 siRNA至关重要。
外泌体（Exosomes, Exo）是一种直径处于30至150 nm之间的双层纳米囊泡，在体内具有良好的生物相容性。外源性寡核苷酸（如 siRNA）可通过电穿孔被有效地包裹到外泌体中，从而防止siRNA降解，确保其完整地输送到靶细胞中。此外，源自骨髓间充质干细胞（BMSCs）的外泌体保留了祖细胞的特定特征，包括固有的肿瘤归巢能力，使其成为有效的天然纳米载体。然而，复发或难治性弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者体内的CD20抗原表达降低或缺失，使得使用利妥昔单抗（RTX）靶向淋巴瘤细胞变得复杂。
（利妥昔单抗耐药的机制模型图）
DSPE-PEG是一种类脂材料，因其能通过与膜脂质的疏水相互作用将功能分子整合到外泌体表面，同时还能赋予外泌体“隐身”特性，最大限度地减少蛋白质吸附，增强肿瘤靶向性和药物递送能力。虽然骨髓间充质干细胞（BMSC）衍生的外泌体产量相对较高，但由于BMSC具有强大的免疫抑制作用，包括抑制T细胞活化和树突状细胞成熟，促进调节性 T 细胞增殖和分化。环磷酰胺（CTX）是 R-CHOP 方案中的一种重要化疗药物，能够抑制Treg细胞功能，并在低剂量时诱导免疫原性细胞死亡，从而增强抗肿瘤活性。免疫原性细胞死亡（ICD）是一种独特的细胞凋亡形式，可激活免疫系统识别并消灭肿瘤细胞。在这一过程中，树突状细胞（DC）发挥着核心作用。它们捕获并处理垂死肿瘤细胞释放的抗原，随后激活 T 细胞，启动针对肿瘤的特异性免疫反应。然而，CTX的抗肿瘤疗效受到其不良药代动力学、低肿瘤蓄积以及对健康组织和免疫细胞的非特异性毒性限制。研究表明，药物与母细胞共孵育后获得的外泌体可包裹药物，与游离药物相比，其抗肿瘤效果更强。BMSC对各种化疗药物（包括环磷酰胺）的敏感性较低，表明其对化疗药物具有广泛的耐受性。这种方法解决了递送疏水性药物的难题，并通过经细胞工程修饰的外泌体增强了抗肿瘤疗效。
（aCD20@ExoCTX/siPDK4在DLBCL中的构建及其靶向治疗机制示意图）
在这项研究中，作者团队设计并构建了一种基于外泌体的 "智能 "靶向递送策略，以逆转 PDK4介导的利妥昔单抗在DLBCL中的耐药性。通过抑制PDK4/HDAC8/CD20信号通路来增强膜蛋白CD20的表达，实现了利妥昔单抗的靶向递送和siPDK4的胞内递送，最终消除了DLBCL细胞的致病性和耐药性。与其他抗体和siPDK4递送方法相比，aCD20@ExoCTX/siPDK4具有以下几个优势： (1）利用外泌体固有的主动靶向能力，实现利妥昔单抗和PDK4 siRNA的高效递送；（2）利用pH响应性化学键裂解，将利妥昔单抗设计成 "守门员 "分子，使药物释放能够响应环境条件； (3) 通过 "再教育（re-educating） "母细胞衍生的外泌体，使其具有诱导免疫原性细胞死亡（ICD）和免疫抑制功能，从而促进协同抗肿瘤免疫疗法。
aCD20@ExoCTX/siPDK4在血液中不会被清除。小鼠器官和肿瘤组织的荧光成像显示，外泌体递送载体经过改良后，对DLBCL耐药细胞的靶向性增强。此外，血常规检测、外周血生化指标和组织学染色结果表明，基于外泌体的纳米药物在小鼠体内具有良好的生物相容性。这种增强的靶向能力和经证实的生物相容性凸显了aCD20@ExoCTX/siPDK4作为靶向耐药DLBCL细胞的有效而安全的治疗潜力。
文献引用
Wu X, Ban C, Deng W, et al. Unveiling the PDK4-centered rituximab-resistant mechanism in DLBCL: the potential of the “Smart” exosome nanoparticle therapy[J]. Molecular Cancer, 2024, 23(1): 144.
（原文链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/39004737/）
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货号 | 产品名称 | 灵敏度 | 检测范围 |
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EHC030a | QuantiCyto® Human IFN-α2 ELISA kit（人-α2干扰素） | 3.9pg/ml | 7.8-500pg/ml |
QuantiCyto® Human IFN-γ ELISA kit（人γ干扰素） | 7.8pg/ml | 15.6-1000pg/ml | |
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EMC016 | QuantiCyto® Mouse IFN-β ELISA kit（小鼠β干扰素） | 3.13U/ml | 6.25-400U/ml |
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