在ELISA实验中，研究人员需要进行多次加样步骤完成实验操作。对于常规双抗体夹心法ELISA，一般有如下加样步聚，即加样本、加检测抗体、加酶结合物、加底物（最后加终止液停止反应）。

加样步骤基础知识

加样步骤中一般使用微量加样器（移液器，移液枪），按照实验规定的用量将液体成分加入酶标板孔板中。每次加入新的液体组分前，应更换新的吸头，以免液体组分间发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。部分加样步骤需使用稀释后的液体组分，如标准品需要经复溶倍比稀释后上样，抗体、浓缩酶结合物需稀释为1×工作液，需要按照说明书的稀释要求，预先在试管、EP管等中按规定的稀释度稀释后再加样。

加抗体、酶结合物工作液和底物工作液时，可用定量多道加液器，节省加样的时间和操作，更好地保证孔与孔间的平行，减少因操作带来的误差。

在ELISA中，一般需进行45加样。“45加样”是什么？

45加样，应当为45度加样，即加样枪的吸头所在的直线应当与板条所在的直线呈45度角，吸头贴着孔壁加入。

▶ 吸取样品时，加样枪吸头不应黏附多余的液体；加样时不可90度向孔中滴加液体，因为这样操作会导致液体残留在吸头上，导致加样不准确。

▶ 吸头所在的直线与板条所在的直线所呈角度不可过小，会使液体残留在酶标板孔的孔壁上，导致加样不准确。

▶ 不要将吸头伸入孔底，一方面若接触孔底可能压弯吸头，另一方面吸头浸入液面下容易产生气泡，导致加样不准确。

以上为ELISA实验中加样tips的全部内容，您学会了吗？

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