支气管肺泡灌洗液（broncho alveolar lavage fluid，BALF）是研究肺部疾病的重要研究对象。作为非常见ELISA样本类型之一，该如何处理该样本呢？

收集得灌洗液样本后，4 °C下以 800-1000 x g 转速离心10 min，其中，样本处理所得上清液供作生物化学和免疫学检测，沉淀物作细胞学检查。将上清液分离并作分装，即可在后续的实验中使用。

本篇样本处理方法旨在作为一般参考，具体方案因样本类型而异，需要您根据参考文献并自行验证决定，从而选择更适合自己样本的处理方案。

以下提供部分样本收集与处理案例：

小鼠支气管肺泡灌洗液制备（来源：Bio-protocol）

该Protocol描述了小鼠中基本的支气管肺泡灌洗（BAL）程序。可以通过Hema3染色，免疫染色，荧光激活细胞分选（FACS），聚合酶链式反应（PCR），二辛可酸（BCA）法蛋白定量，酶联免疫吸附测定（ELISA），luminex检测等来分析从BAL获得的细胞和液体。

1. 在二氧化碳箱中通入CO2处死小鼠。

2. 将实验鼠移到生物安全柜。

3. 用70％乙醇浸湿小鼠。

4. 将小鼠正面朝上放在泡沫塑料板上，用针或胶带固定手脚（图 1A）。

5. 用剪刀从腹部至颈部切开皮肤，用镊子撕开皮肤，露出胸腔和颈部（图 1A）。

6. 轻轻去除颈部肌肉，露出气管（图 1B）。

7. 用镊子将一根约10 cm长的尼龙绳放在气管下方（图 1C）。

8. 小心剪开肋骨，露出心脏和肺（图 1D）。注意：不要剪断气管和肺！

9. 将留置导管插入气管，用尼龙绳将导管和气管链接牢固（图 1E-1G）。

10. 在 1 毫升注射器中注入 0.8 毫升 PBS，并将其置于导管末端（图 1H）。

图 1

11. 将PBS缓慢注入并吸出，重复4次，将注射器从导管上拔出，将回收的灌洗液保存在1.5 ml的 Eppendorf（EP）试管中并置于冰上。

12. 重复步骤10-11三次。

13. 根据1.5 ml EP 管上的刻度记录BALF容量。

14. 在4 °C下以 800 x g 转速离心10 min。

15. 将上清液转移到新的5 ml管中，加入蛋白酶抑制剂混合物至终浓度为1mM和PMSF至终浓度为1mM，并充分混合。如果不立即使用，冻存于-80°C。此时上清液中的细胞因子/趋化因子和其他成分的蛋白质可通过BCA法、ELISA法、荧光检测法等进行样本分析。

参考文献

Sun, F., Xiao, G. and Qu, Z. (2017). Murine Bronchoalveolar Lavage. Bio-protocol 7(10): e2287. DOI: 10.21769/BioProtoc.2287.

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